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雙向電泳與質樸鑒定

雙向電泳(包括熒光差異雙向電泳)是將不同來源的蛋白樣品進行分離和定量,結合基于MALDI-TOF/TOF的串聯質譜技術對差異表達蛋白進行鑒定的蛋白質組學研究經典和常用的技術之一。雖然現在由于該技術分辨率相對較低,限制了在高復雜度樣品中的應用,但由于其具有易觀察、成本較低等優點,仍然是蛋白質組研究的重要技術手段之一。

技術流程

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技術特征

Silver stain:具有較高的靈敏度,但質譜兼容性一般。

CBB stain:操作簡便、重復性較好、質譜兼容性高但靈敏度一般。

DIGE stain:無需染色、重復性好、定量準確、質譜兼容性高但費用較貴。

案例展示

案例一  蛋白組學及VIGS策略發現棉酚、油菜素內酯及茉莉酸對棉花抗黃萎病的作用


實驗材料

抗病棉花品種G.barbadense cv7124

疾病組:接種病原菌的棉花葉片

對照組:接種無菌水的棉花葉片

研究結論

比較蛋白組學的應用鑒定了引起病原反應的蛋白,詮釋了棉花抗黃萎病的機制。

采用VIGS技術驗證了棉酚、油菜素內酯等對于棉花抗病的作用。

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參考文獻
Gao W. et al., Proteomic and virusinduced gene silencing (VIGS) analyses reveal that Gossypol, Brassinosteroids and Jasmonic acid contribute to the resistance of cotton to Verticillium dahlia, 2013, Mol. Cell.Proteomics.

已構建的蛋白數據庫

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