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外泌體研究
外泌體(exosomes)是一種能被機體內大多數細胞分泌的直徑大約為 30 - 150 nm 的具有脂質雙層膜的微小膜泡。它廣泛存在并分布于各種體液中,攜帶和傳遞重要的信號分子,近來的研究表明,miRNA 存在于體液中的外泌體內,進行遠距離的信息傳遞,在細胞分化、生物發育及疾病發生與發展過程中具有相當大的作用。
目前對于外泌體的鑒定主要有四種方法:透射電子顯微鏡(TEM)、Nanosight、WesternBlot、流式細胞術。
歐易特色
項目經驗豐富
數千例樣品實操經驗積累,不斷優化流程
全流程服務
提供從外泌體分離、微量抽提、文庫構建、測序到生物信息學分析整套服務
全程質控
提供外泌體透射電鏡檢測、BCA 蛋白定量、Agilent 2100 RNA 質檢及測序文庫定性定量質檢,
有效規避實驗風險,保證項目成功率
外泌體—small RNA 研究技術(歐易提供)
●  Agilent 芯片      ●  Affymetrix 芯片     ●  small RNA 測序     ●  PCR-Array
案例展示
通過二代測序技術發現 miR-21 在腫瘤相關脂肪細胞和成纖維細胞的 exosome 中的表達量明顯高于卵巢癌細胞。腫瘤相關的脂肪細胞和成纖維細胞中的 miR-21 可以轉移到卵巢癌細胞中,miR-21 通過靶基因 APAF1 來抑制卵巢癌細胞的凋亡并產生化療抗性。此外,轉移性卵巢癌細胞可通過相鄰基質細胞的外泌體遞送 miR-21 來獲得(圖 1)。

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圖 1 | miR-21 在腫瘤相關的脂肪細胞分泌的外泌體上調表達
參考文獻
Au Yeung CL, Co NN, Tsuruga T, et al. Exosomal transfer of stroma-derived miR21 confers paclitaxel resistance in ovarian cancer cells through targeting APAF1. Nat commun 2016; 7:11150. (IF: 12.353)
常見問題
1.哪些樣品類型適合開展外泌體 small RNA 測序?
答:外泌體主要存在于體液中,根據體液類型不同,其外泌體含量有較大差別,一般在血清/血漿中含量相對較高,而細胞培養上清、尿液、唾液等中外泌體含量偏低,因此建議優先選擇血清/血漿樣品進行相應實驗(細胞培養上清需要提供 50 ml 以上)。
2.外泌體的分離采用哪一種技術更好?
答:由于樣本性質和來源不一,目前仍沒有一種方法能兼顧外泌體得率、純度及生物活性。目前外泌體分離技術大致分為兩類:超速離心、提取試劑盒。
超速離心:是囊泡分離的“金標準”,外泌體得率較高;但對實驗儀器要求特殊,耗時較長,無法實現高通量。
提取試劑盒:基于外泌體表達的特異性表面抗原,利用相應的抗體通過免疫親和分離,無須超速離心,耗時較短,可實現高通量;但相比超速離心,外泌體得率較低。
目前歐易生物分離外泌體采用的是 Qiagen ExoEasy kit。
3.能否進行外泌體中 mRNA 或 lncRNA 的檢測?
答:除 small RNA 外,也可以對外泌體中其他 RNA 進行檢測。但外泌體中的 mRNA、lncRNA 等大分子量 RNA,含量較低、數量較少,并且穩定性比 small RNA 差,容易發生降解,檢測的穩定性與重復性不如 small RNA。
樣品須知

鏈接:如何搞定外泌體樣本



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