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酵母雙雜文庫案例:泛素分離蛋白的酵母雙雜交系統研究BAP31與PTPLB的互作-歐易生物

泛素分離蛋白的酵母雙雜交系統研究BAP31與PTPLB的互作

傳統的酵母雙雜文庫技術發現了很多細胞通路中可溶性蛋白的相互作用,而由于技術手段的局限膜蛋白的研究相對較少。基于泛素分離蛋白系統的酵母雙雜交系統可解決這一問題,但到目前為止,這個系統還局限于研究已知的膜蛋白相互作用。本文構建了基于泛素分離蛋白的cDNA文庫并且提供了進行該實驗的細節,從而篩選誘餌蛋白BAP31的結合蛋白。BAP31是內質網膜蛋白,可作為分子伴侶(或運輸受體)和凋亡調節因子。文中研究了一種新型的來源于酪氨酸磷酸酶樣B(PTPLB)家族的蛋白,這種膜蛋白有四個α螺旋跨膜結構,可與BAP31發生互作,可通過蛋白酶系統迅速降解。通過比較BAP31敲除型和人BAP31表達型的鼠細胞表明BAP31對于PTPLB穩定是必需的,與起初認為的BAP31蛋白在內質網的功能一致。


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